据南京巴傲得生物科技有限公司2013年7月26日10:15最新数据分析：质粒构建重组质粒最好的方法由南京巴傲得生物公司教授解答。巴傲得生物科技有限公司是专业从事质粒构建、质粒构建商家、、、IHC试剂盒、抗体定制等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。电话：***。
自杀性质粒载体：一般用于基因突变。将突变的目的基因克隆到自杀性质粒载体上，通过接合等使其进入宿主，由于在宿主菌中不存在复制基因启始所需的复制蛋白（如Pi蛋白等），其无法复制，在外界选择性压力的作用下,自杀性质粒载体所携带的突变基因就与宿主染色体上的野生型发生基因发生二次同源重组，产生了带有突变的突变株；而质粒载体自身由于自杀性特性连同染色体上原有的野生型基因一起随着细菌的传代从菌体内消失。至于一次重组的突变株，可借助质粒上的某些选择基因（如sacB，sucrose敏感）筛除。
通过分子生物学手段构建重组质粒，将其转入野生型大肠杆菌W3110，分析含苏氨酸操纵子基因的质粒及质粒定点突变解除反馈抑制时，对 L-苏氨酸积累的影响。【方法】以 W3110染色体DNA为模板，PCR扩增苏氨酸操纵子基因，即启动子THrLp 、编码前导肽基因thrL以及thrA 、thrB 、thrC 基因，通过重叠延伸PCR的方法对thrA 基因定点突变，解除苏氨酸对它的反馈抑制，构建出重组表达质粒pWYE112 和pWYE134,5L发酵实验测定L- 苏氨酸的产量。
结果 重组质粒体外表达目的蛋白的相对分子质量（Mr）约为55×103。免疫小鼠后可诱导产生特异性抗体，其中IgG2a与IgG的比例显著高于IgG1与IgG的比例；T淋巴细胞体外经ConA刺激后SI达到160.67，显著高于对照组（14.04，P＜0.05）；产生IFN-γ的CD8+T淋巴细胞数目以及特异杀伤率均显著高于对照组小鼠（P＜0.05）。
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