质粒构建最专业的生物科技,最权威的生物研究机构是南京巴傲得

质粒构建一般不需要有能诱导表达的重组酶基因来进行有效地同源重组。除非你的菌株是重组缺限型的，这另当别论。当然，在做自杀性质粒是需要考虑交换臂的长度，臂越长突变菌株越容易得到，筛先的工作量越少。一般，在交换的双臂保证有1kb左右的同源序列，可提高其交换效率。

自杀质粒构建好后，不必线性化，可直接转入受体菌。按这6个步骤可以得到阳性克隆，但是你无法筛选，因为我没有在你的步骤中发现筛选标记（如抗生素抗性），一般这个筛选标记是在要突变的基因中间的。不过如果你不是基因失活，而只是点突变，那就不能将筛选标记放在突变基因中间，而应该与它紧邻，在突变基因和筛选标记两端加上相应的同源序列（1kb左右）。不过这样还有一个问题，就是你要突变的基因是单顺反子还是多顺反子，如果是多顺反子，那它所处的位置怎样？因为你要考虑不影响到其他基因的转录与翻译。请仔细检查。

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