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最新蛋白表达技术选哪家?最权威的生物公司首选南京巴傲得

发布于:2013年08月26日 来源:www.fuhai360.com
[摘要]最新蛋白表达技术选哪家?最权威的生物公司首选南京巴傲得。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、最新蛋白表达、质粒构建、最先进的蛋白表达、抗体定制权威机构、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***

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现有外源基因表达系统主要包括:细菌、丝状真菌、酵母、哺乳动物细胞、动物乳腺、昆虫(昆虫细胞、昆虫杆状病毒和昆虫整体)和植物表达系统(植物整体、病毒载体和油体)等。这些外源基因表达系统在表达量、表达产物的分离纯化及活性、成本等方面各有优缺点。从近年的研究进展看,利用植物表达系统大规模生产各种目的蛋白还受到诸多因素的限制,表达量低、提取和纯化成本高是主要的限制因素。植物油体表达体系将目的蛋白的编码基因插入油体蛋白(oleosin)编码基因的3`端,以oleosin启动子驱动目的蛋白与oleosin一起在转基因植物的油体中特异表达,获得转基因植物种子后,将种子粉碎, 利用油体的疏水性,离心将油相和水相分开,回收上层油体部分,即可去除种子中大部分的非目标成分,从而显著降低目的蛋白的分离纯化成本,因此近年来倍受关注。作为一种新型的植物生物反应器,为最终利用转基因植物生产外源蛋白提供了新的途径。

1 首先要知道你要纯化蛋白的编码DNA序列,查阅相关文献,看目的基因在那些细胞或者组织中高表达,进而设计该基因的引物,扩增出目的DNA片段的ARF。这一布叫目的基因片段的获取
    2 构建表达载体:根据你获得的基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达,这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒,导入表达系统中。一般原核表达时间短,成本低,表达量大,常优先考虑;但是有些基因在E coli中就是表达不出,可能是密码子优化等出现问题,也或者是由于想纯化得到更好的活性蛋白的考虑(原核的蛋白折叠系统显然没有真核的好),有很多研究者选择在毕赤酵母中表达。(我手里就有相关资料,因为以前做过表达纯化及后来的单抗制备),这一步再强调一下,优化密码子对于蛋白的成功表达很重要
    3 载体构建好了,下面就是重组蛋白的表达了。这一过程涉及到用多少的诱导剂,诱导多少时间才能得到最多的蛋白的问题,即优化表达条件。就是在上述不同量诱导剂诱导条件下,取菌体上清(分泌型)或者破碎细胞(胞内表达的蛋白)电泳,看是否得到目的分子量大小的蛋白
    4 蛋白表达成功,下面是根据蛋白质本身亲水/疏水,电荷带电特性等确定蛋白纯化的方法。一般步骤:离心,取蛋白所在的相

 

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