据南京巴傲得生物科技有限公司2013年8月29日10:15最新数据分析:质粒构建生物克隆选【南京巴傲得】高技术提取放心无误。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的蛋白表达、权威机构、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***
因为基因直接克隆出来,酶切得不太好,而且也不容易连到PET上面,而PMD是克隆载体,上面添加了多聚T,PCR的产物末端通常会多P出几个多聚A,A和T互补,再用连接液连接,就非常容易连上,PMD是高拷贝质粒,将会复制出很多质粒,再酶切提出里面的目的片段,连到PET上就相对容易了
在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切点,就会使抗四环素基因失活。这时,含有DNA插入片段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素,但对四环素敏感。没有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素,而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322相似,只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点。质粒运载体的最大插入片段约为10 kb(kb表示为千碱基对)。
表达后可拥有新的蛋白质,即通常说的重组蛋白或融合蛋白(质粒表达)。我举个例子,加入蛋白质ABC和DEFG分别由三个结构域和四个结构域组成,而你需要分子量小且具有第一个蛋白A结构域的功能和第二个蛋白中G结构域的功能,那么你可将AG基因克隆,装入载体后进行表达,这样产生了新蛋白AG。当然这只是理论上,新蛋白表达后是否能够具有原来AG的功能,能否表达出来,表达量高低等等都是你所要考虑的问题
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