据南京巴傲得生物科技有限公司2013年9月29日12:00最新数据分析:质粒构建开发商选哪家才放心?南京唯一一家国际一流生物公司巴傲得。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的蛋白表达、、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***
在基因治疗中, 实现目的基因的调控表达是非常重要的。然而, 传统基因载体的无调控地持续或不适当的表达会影响治疗效果, 甚至可能带来致命的副作用。在本研究中, 我们构建了一种带有DsRed红色荧光蛋白报告基因并可经RU486诱导的真核表达载体, 并在体外评估了其调控表达作用。利用分子生物学技术, 将DsRed基因和启动子, 以及RU486系统构建成单一的质粒载体PDC-RURED, 为减少RU486调控元件和基因表达元件之间的相互干扰, 在两者之间加入1.6 kb的绝缘子。经PCR检测和限制性酶切分析及序列测定均证实了载体的正确性。在转染HEK293细胞后, 运用荧光显微镜和流式细胞技术证实了该载体的调控能力。没有RU486时, 几乎没有红色荧光蛋白的表达, 而加入诱导剂RU486后, 最高可以实现红色荧光蛋白的40余倍的表达。实验结果表明构建的可经RU486诱导的新型真核表达载体可以实现对目的基因的表达时间和表达水平的调控, 为进一步的基因调控研究和和基因治疗提供了良好的工具。
如果是需要把一个特定的基因片段扩增后,插入到载体上构建质粒,则要根据载体上多克隆位点带有的酶切位点,在自己的目标基因片段上下游都分别设计一段序列,并在设计的序列中引入载体上的酶切位点。这个时候设计出来,用于完成PCR扩增,并能够在目标序列上下游都引入酶切位点的两段序列就叫做质粒构建引物。这样扩增获得的目标片段两端就带有了酶切位点,经过酶切后,与同样经过酶切的载体就可以连到一起,形成环状,完成质粒的构建。
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