据南京巴傲得生物科技有限公司2014年1月8日17:00最新数据分析：质粒构建载体如何提取?最好的质粒构建专家来为您解答。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***
构建之后，这三种情况都是存在的，然后先把这所有的全部导入细胞（当然不是同一个细胞），在质粒上会有某种抗性基因，就加入这种抗性基因（比如它抗某种抗生素，就加入这种抗生素，含目的基因—目的基因的这种重组片段的就被杀死了）。然后将剩下的继续培育，再利用DNA分子杂交技术，将质粒-质粒的排除，剩下的就都是符合的了。（再利用mRNA分子杂交和抗原抗体杂交，检验能否正常表达。这就是检验基因工程是否成功的了，与筛选你说的那三种无关）
我估计这个构建是利用你提到的酶切位点在你所说的“特定启动子”和“终止子”之间插入目的基因，这样一来，如果构建成功，就会破坏了原来位于该“特定启动子”和“终止子”之间的四环素抗性基因，即“目的基因－载体连接物”不具有四环素抗性。又因为青霉素抗性基因在该特定启动子和终止子之外，无论构建是否成功，都不会影响青霉素的抗性。综上，“目的基因－载体连接物”的受体细胞具有青霉素抗性但不具有四环素抗性。因此，可以首先利用青霉素抗性筛选出全部连接产物（在青霉素抗性培养基上可以存活），然后再利用四环素抗性进行筛选剔除“载体－载体连接物”（这种连接没有破坏原有的四环素抗性）。也就是说所有既抗青霉素又抗四环素的都丢掉，只留下只抗青霉素不抗四环素的克隆。不知道这样说你明白了吗？
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