深圳科软KR仿手工甩干式免拍板洗板机之酶联免疫测定法（ELISA)试剂

       科软仿手工甩干式全自动洗板机是传统洗板机和传统甩干机的有机组合的一体机。相对传统洗板机而言，其最大特点是：1、不用人工拍板；2、不会堵针；3、故障低；4速度快。

       不吸液：删除吸液针等吸液系统，利用旋转和重力去液。

       无污染：水平放板，旋转向下甩液，保证最大程度去液。独特锅底状接液设计，极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。

       免拍板：微孔内无残留，洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。

       不堵孔：无吸液针，极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理，实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗，避免结晶堵塞。开关机自动维护，保证管路内畅通无阻。

       不撞针：注液针不移动，与微孔板保持足够距离，有效保护酶标板和孔内包被。

       可条洗：每块板可以任选条数进行清洗，节省洗液，保护环境。

       速度快：一次可洗1—6块板，KR306洗好6块板约4分钟。

        1.原理将抗- H B s包被在固相载体上，与待测样品中的H B s A g反应,再加人酶鉍记的抗- HBs,最后加底物显色,这种试剂既可定性乂可定貴检测。
2.试剂制备
       （1)抗- H B s的纯化通常采用效价丨：（512 ~ 丨024)的豚鼠抗- H B s也淸或髙亲和力的单克隆抗体。抗血淸或单抗腹水经两步（N H 4)2SO, 沉淀后,用D E A E - 纤维素作离子交换进一步纯化,得其IgG。选择适当浓度用于固相栽体包被。选择效价最高管,用于K 标记。
          (2)辣根过氧化物酶（H R P )标记抗- H B 8 的制备酶标记的方法很多，以过碘氧化法为最常用。主要步骤如下:将辣根过氧化物酶溶中,加二硝基氰苯无水乙餑溶液,室ffl下搅拌，再加过磺酸钠（NalO,)继续搅拌，随后加人乙二醇，以0. 1 mol/LpH 8.6碳酸盐缓冲液透析,得醛基化酶。将含抗体的碳酸盐缓冲液加到醛基化酶液中，使酶和抗体交联。加人硼氢化钠,再用（NH,)2so4沉淀酶标抗体。沉淀溶于磷酸盐缓冲液中并充分透析。分装后,冷冻干燥保存。
         在酶标试剂中,包被和标记的抗体有多种搭K 方式,有采用多克隆抗体做包被和标记的抗体;也有用多克隆抗体包被,用单克隆抗体作酶标记或用单克隆抗体（一或多个）包被,标记抗体采用多抗,还有包被和酶标记都用单抗的。在最后这种情況下,包被抗体和酶标抗体必须选择作用于不同抗原决定簇的2 株单克隆抗体。由于使用2 个不同位点的抗体，在实际测定步骤中,可采用一步法,即酶标抗体与待测样品同时加人酶标反应孔内，这样可缩短反应时间,这是其很大的优点。但必须注意,这种一步法试剂质童是至关重要的,它必须保证不发生“强阳性漏检”。
          为了进一步节省时间,很多酶标试剂中都加人抗原抗体反应的催化剂，如聚乙二醉、左旋糖苷等。
3.试剂的质控标准
          (1)特异性对2 0份H B s A g阴性参比的反应不得有假阳性,一步法试剂盒必须加试3 份对流电泳(CEP)效价为丨:64的H Bs A g阳性血淸,其结果不得出现假阴性。
         (2)灵敏度对adr、a d w和a y w 3个典型的HBsAg定量参比的检测结果应呈规律,Jft小检出ft为在0.5 W5/L。如果采用一步法则必须增加特别强的H B s A g阳性标本作为通过标准,不能出现强阳性漏检(假阴性）问题。
         (3)锖密度甲行检测精密度参比丨0 孔（或1 0珠）•变异系数C V € 1 0 % , 5组线性参比各测5 孔(珠），其剂量反应应呈线性，相关系数r 多0.95(丨叫= 丨.6 ,U HBsAg)。
         (4)有效期4 - l O t 保存至少6 个月。
4 .检测方法
         (1)包被用抗- H B s加包被缓冲液稀释后,加人酶标反应板中,放置于4 - 10 *C24H，用洗涤液将板洗干净。目前,市场上供应的这种试剂已改用預包被的酶标反应板，即在出厂前已将抗_ HBs包被在酶标反应板上,加适摄保护剂,干燥后用锡纸袋包装,抽真空可稳定半年。再按成品检定项目进行检定,合格后方可使用。
        （2)加样品将待测样品50 (J,HBsAg阳性及阴性对照血淸加人反应孔中,加样妨均为5 0 W ,加酶,空白对照孔什么也不加。置于3 7尤水浴l h u 将板洗涤5 次，每次沒泡20 s„
         (3)加底物底物邻苯二胺用0. 1 mol/L pH 5 . 0枸橼酸底物缓冲液溶解,加人双氣水混匀后加人各孔中，避光放置15 min,在每孔中加硫酸溶液终止反应。目前也有厂家采用毒性较低的四甲基联笨胺(T M B )代鞞邻苯二胺。
        (4)结果判断①目测法阳性对照孔应呈明显黄色,阴性对照孔应接近无色。凡样品测定孔的颜色明显深于阴性对照孔,即为HB s A g阳性样品。②晦标仪测定法在波长492 n m处用空白对照校零,当样品孔0 D 值/阴性对照孔平均0 D 值2 . 1时,此为HBsAg阳性样品。
       实验中所用器材必须十分淸洁,所用试剂及蒸《水必须符合要求；每次洗板应洗净，除尽孔中残留液;待测样品须新鲜，不得有溶血或长菌，否则易导致假阳性。