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有读过有关《生物实验室安全故事手记》的朋友吗？你们曾记否里面的大彰显的目录吗？哈哈哈

第一章：支原体的“人体培养基”、

第二章：“刀尖上的舞蹈”—一微生物操作中的个人防护

第三章：大肠杆菌也致病!

第四章：“知己知彼，方能百战百胜”——了解菌株特性

第五章：“纯正血统”很重要!

第六章：抗生素，小事不小，菌种保存及传递

第七章：培养基熔化伤人事件

第八章：摇床也疯狂?

看看上面这些是不是醉了?微生物实验室其实没那么吓人，按照生物实验室等级来分，一般的微生物实验P2环境就ok了，类似食品厂、药厂、检验检疫类微生物限度、大肠杆菌、一般的致病菌鉴定(革兰氏、沙门氏菌等)，按规范均属P2(bsl-2)，有个单独的有门房间、有通风灭菌措施、放个超净台或生物安全柜(一级屏障)即可。做好安全防护，基本没有感染致病菌病原体的可能。

实验室安全设备：

1.生物安全柜

2.高压灭菌器

3.离心机

4.负压柔性薄膜隔离装置

5.洗眼器

生物安全柜有多重要?

生物安全柜

1.安装要求：清洁环境，远离人员、物品流动大的地方; 远离门和窗; 侧面留有30cm的间距;预留出30-35cm空间连接管道，外接的排气口要比楼层高2米;专用电源。

1.正确安装，确保安全柜与外部排风系统压力平衡，保证安全柜处于正常工作状态。

2.定期维护和检测，确保安全性。

3.注意保洁，每天做完实验后，清除所有废弃物，再用75%酒精消毒。

4.一般滤膜有5-10年使用寿命，在仪器压力表显示压力为50%时候，需更换滤膜。

2.操作规范：

1)操作人员:维持生物安全柜开口处气流的完整性。双臂应垂直缓慢进出安全柜。进入后等待约1min，再操作。必需的物品提前置于安全柜内，减少双臂进出次数。

2)生物安全柜运行:A1及A2型，不使用时可以关闭。B1和B2型始终保持空气流动以维持房间空气平衡。开始工作前和完成工作后，应运行数分钟排出污染空气。

3)物品放置:①生物安全柜前后气格栅不被阻挡;②安全柜内物品应70%酒精表面消毒;③物品应尽可能地放在工作台后部，可产生气溶胶的设备靠后部放置;④盛装生物危害性废弃物的物品，放在安全柜内某一侧，不应放在柜外面;⑤工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。

3.理想的工作台摆放原则：

在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行

4)紫外灯:每周对紫外灯进行清洁，避免灰尘和污垢影响杀菌效果。定期检查紫外线的强度，操作时关闭紫外灯，实验前、后开启20-30min。

5)明火:避免使用明火对气流产生影响。用微型燃烧器对接种环灭菌。

6)溢出物处理:发生感染性物品溢出时，在安全柜工作状态下，用有效消毒剂立即进行清理，尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒或高压灭菌。

7)保持洁净:在实验结束时，所有物品清除表面污染后移出安全柜。擦拭生物安全柜的内部表面污染。用70%酒精消毒。

8)个人防护:在进行一级和二级生物安全水平的操作时，可穿普通实验服。在进行三级和四级生物安全水平操作时，使用前面加固处理的反背式实验隔离衣。手套应套在隔离衣的外面，可以戴加有松紧带的套袖来保护操作人员的手腕。有些操作还需戴口罩和安全眼镜。

9)警报器:生物安全柜采用两种警报方式，窗式警报器提示滑动窗移到适宜的位置;气流警报器表明正常气流模式受到了干扰，立刻停止工作，并通知实验室主管。

4.维护校验：

在进行维护、更换过滤器、性能测试、以及气体消毒以前，应使用消毒剂清除所有内部工作表面和暴露内表面的污染。

评估内容：安全柜的完整性、HEPA过滤器的泄漏、向下气流的速度、正面气流的速度、负压/换气次数、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统进行测试。还可选择进行漏电、光照度、紫外线强度、噪声水平以及振动性的测试。

个人安全防护用具：

1.实验服、隔离衣、连体衣、围裙

2.护目镜、安全眼镜和面罩

3.口罩及防毒面具

4.手套

5.鞋

P4实验室穿什么?

生物实验室技术规范

标本的安全操作

1.标本收集 容器坚固，防止意外破损。标本不得超过总体积的50%，无泄漏，外部无残留。粘贴标签，要求或说明书与标本分开放置，并置于防水袋中。

2.标本运输 使用可高 压灭菌或耐受化学消毒剂的二级容器，固定标本容器并保持直立运输。

3.标本处理 接收大量标本的实验室应安排专门的房间或空间。工作人员了解标本的潜在危害和防护方法，掌握破碎或泄漏容器的处理方法。内层容器需在生物安全柜内打开，并准备好消毒剂。

实验室仪器和器具操作

1.移液管和移液器

2.离心机：离心桶的装载、平衡、密封、打开在安全柜中进行。每次使用后要及时清除离心桶、转子和离心机腔的污染

3.搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用

确认仪器正常运转。建议使用聚四氟乙烯(PTFE)器皿。应有防护装置，有条件在生物安全柜里，覆盖塑料罩操作。在操作结束后，应在生物安全柜里开启容器。使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。

4.冰箱

冰箱、低温冰箱和固体干冰盒要定期除霜和清扫。破裂的安瓿、冻存管等要及时清除，应配戴面部保护装置并戴手套，清扫后，进行表面消毒处理。

冰箱内容器有清楚的标签(内容物的科学命名、贮存日期和贮存人)，无标签及过期材料应高压灭菌后丢弃。对于冰箱内的储存物应有详细的目录。

除非有防爆措施，严禁将易燃液体保存在冰箱里，冰箱的门上应张贴这方面的注意事项。

5.玻璃器皿和锐器

尽可能用塑料制品代替玻璃制品。用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管

减少使用注射器和针头，必须使用时采用锐器安全装置。

严禁给用过的针头戴护套。

6. 装有冻干传染性物质安瓿开启与储存

安瓿开启：首先消毒安瓿的外表面，再用砂轮在安瓿外表面的棉塞或纤维塞中部挫一划痕，手里垫一块酒精浸透的棉花再握住安瓿，轻轻地移去安瓿顶部并将其按污染物处理。如果棉塞或纤维塞留在安瓿上，则将其用灭菌镊子除去。向安瓿内缓慢地加入液体以重悬内容物，避免产生泡沫。

安瓿储存：不得将装有感染性物品的安瓿侵入液氮，可将感染性物质真空冷冻干燥后超低温保存。从冷藏处取出安瓿时要进行眼睛和手的防护

7. 感染性物品操作

(1)血样采集:由受过培训的人员采集，戴手套操作。检验申请单放在防水袋或信封内，不应打开袋子。

(2)血清分离:操作人员经过严格培训，操作时戴手套、眼睛和粘膜保护装置。操作中避免或尽量减少气溶胶的产生，不得倾倒。废弃标本管需高压灭菌。操作前应准备相应的消毒剂，用于及时处理喷溅和溢出的标本。

(3)涂片、盖玻片、组织及组织切片:用于显微镜观察血液、唾液等标本所使用的载玻片、盖玻片、染色及洗液等废弃物均经消毒液浸泡或高压灭菌后再丢弃。组织标本应用甲醛或多聚甲醛固定，避免冷冻切片。如果必须进行冷冻切片，应当使用安全罩，戴安全防护面罩。清除污染时，仪器温度要求升至室温。

生物实验室废弃物处理

生物废弃物容器充满量不能超过设计容量，外表面被感染性废物污染时，对被污染处进行消毒处理或加一层包装。

所有弃置的实验室生物样本、培养物和被污染的废弃物在从实验室中取走之前，应使其达到生物学安全，常采用高压蒸汽处理。

锐器(针头、小刀、金属和玻璃等)直接弃置于防刺破防流失的锐器安全处置容器内，严禁用手盖帽、拆卸、故意弯曲、消毒、毁形等。

运送人员从医疗废物产生地点将分类包装的医疗废物按规定时间和路线运送至指定暂时贮存地点。

运送医疗废物时，应防止造成包装物或容器破损和医疗废物流失、泄漏和扩散，并防止医疗废物直接接触身体。

感染性物质、动物尸体、组织等塑料袋密封运送二级焚烧室(温度至少1000度，彻底焚烧) 。

附科普：四级生物安全实验室等级划分

每类生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度各分为四级。各级实验室的生物安全防护要求依次为：一级最低，四级最高。

1、一级生物安全防护实验室

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。

基本要求：

建设选址方面无特殊要求;

不需要安装生物安全柜等防护设备;

应能防止昆虫和啮齿动物等进入;

在可以开启的窗户上安置纱窗;

应配备消毒设备;

在靠近实验室出口处设立洗手池;

地面光滑无缝，台面耐热、耐腐蚀、耐水。

操作规范：不需要制订特殊的安全操作规程

    2、二级生物安全防护实验室

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。

基本要求：

除满足BSL-1实验室的全部要求之外;

配备高压蒸汽灭菌器、化学消毒装置等消毒灭菌设施;

安装不低于II级的生物安全柜;

实验室的门能自动关闭;

实验室应配备洗眼装置、喷淋装置等;

需制定专门的安全操作规程。

       3、三级生物安全防护实验室

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。

4、艾滋病病毒的研究(血清学实验除外)应在三级生物安全防护实验室中进行。

基本要求：

除满足BSL-1、2实验室的要求之外;

独立建筑物或者在建筑物中自成隔离区;

在主实验室内设置Ⅲ级生物安全柜;

设置不产生蒸汽的高压灭菌锅或其他消毒装置;

实验室应明确划分为清洁区、半污染区和污染区;

安装独立的通风空调系统以控制实验室气流方向和压强梯度;

实验记录等资料通过传真机等发送至实验室外;

不得将任何未经消毒灭菌的材料带出实验室;

制定更加严格的生物安全操作规范。

  4、四级生物安全防护实验室

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。与上述情况类似的不明微生物，也必须在四级生物安全防护实验室中进行。待有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在四级还是在较低级别的实验室中处理。

基本要求：

除满足BSL-1、2和3级生物安全实验室的要求之外;

分安全柜型实验室和穿着正压服型实验室;

安全柜型实验室中所有操作均在Ⅲ级生物安全柜中进行;

正压服型实验室中工作人员必须穿着特殊的正压服式保护服装;

设立在独立建筑物内，且该建筑应远离市区;

制定最严格的操作规范。